Neospora caninum infection in cattle in the state of Amazonas, Brazil: seroprevalence, spatial distribution and risk factors / Infecção por Neospora caninum em bovinos no estado do Amazonas, Brasil: soroprevalência, distribuição espacial e fatores de risco

Abstract Livestock in the Amazon has grown significantly and, although neosporosis in cattle has been reported worldwide, there is no information about N. caninum in production systems in the state of Amazonas. The objective of this study was to determine the prevalence of anti-Neospora caninum antibodies in cattle, their spatial distribution and the risk factors associated with N. caninum infection in the state of Amazonas. Questionnaires were applied to farmers to assess risk factors associated with N. caninum infection. Blood samples were collected from 1,073 animals on 47 farms in 33 municipalities in the four Amazonian subpopulations. IgG anti-N.caninum antibodies were detected by the indirect fluorescence test, with a general prevalence of 30.2%, being seropositive in 43 farms (91.5%), with prevalence ranging from 2.2% to 69.2%. The highest number of high density points was found in subpopulation 3 (municipality of Apuí and other municipalities on the Madeira River and affluent). It was concluded that N. caninum is present with high seroprevalence values, when compared to other cattle producing states in the Amazon region of Brazil. The identified factors can be used as risk indicators so that control measures can be implemented to prevent infection by N. caninum in these herds.

Resumo A pecuária na Amazônia tem crescido significativamente e, embora a neosporose em bovinos tenha sido relatada em todo o mundo, não há informações sobre N. caninum nos sistemas de produção no estado do Amazonas. Objetivou-se determinar a prevalência de anticorpos anti-Neospora caninum em bovinos, sua distribuição espacial e os fatores de risco associados à infecção por N. caninum no estado do Amazonas. Questionários foram aplicados aos fazendeiros, para avaliar fatores de risco associados à infecção por N. caninum. Amostras de sangue foram coletadas de 1.073 animais em 47 fazendas, em 33 municípios das quatro subpopulações amazonenses. Anticorpos IgG anti-N.caninum foram detectados pelo teste de imunofluorescência indireta, com prevalência geral de 30,2%, com soropositividade em 43 fazendas (91,5%), com prevalência variando de 2,2% a 69,2%. O maior número de pontos de alta densidade foi encontrado na subpopulação 3 (município de Apuí e demais municípios do rio Madeira e afluentes). Concluiu-se que N. caninum está presente com altos valores de soroprevalência, quando comparado a outros estados produtores de gado na região amazônica do Brasil. Os fatores identificados podem ser usados como indicadores de risco, para que medidas de controle possam ser implementadas para prevenir a infecção por N. caninum nesses rebanhos.

Seroprevalence of Toxoplasma gondii, Neospora caninum, and Leishmania spp. in hunting dogs from Mato Grosso do Sul, Brazil / Soroprevalência de Toxoplasma gondii, Neospora caninum e Leishmania spp. em cães de caça do Mato Grosso do Sul, Brasil

ABSTRACT: Toxoplasmosis, neosporosis, and leishmaniasis are important diseases of worldwide distribution and can affect both pets and humans. Hunting dogs have been trained to hunt domestic and wild animals, which makes them more exposed to parasitic infections. The present study aimed to evaluate the seroprevalence of Toxoplasma gondii, Neospora caninum, and Leishmania spp. in hunting dogs from a rural area in Mato Grosso do Sul, Brazil. Serum samples were collected from 39 American Foxhound dogs, and the sex and age variables were recorded. Serum samples were subjected to an indirect fluorescent antibody test (IFAT) to detect antibodies. Seroprevalence was 35.9%, 15.4%, and 2.6% for Toxoplasma gondii, Neospora caninum e Leishmania spp., respectively. There was no statistical difference between genders for these diseases (P>0.05). Results demonstrated a circulation of these protozoa in hunting dogs in a rural area of ​​the state of Mato Grosso do Sul, which can contribute to the epidemiology of these diseases.

RESUMO: Toxoplasmose, neosporose e leishmaniose são importantes doenças de distribuição mundial e podem afetar tanto os animais de companhia quanto os humanos. Os cães de caça têm sido treinados para caçar animais domésticos e selvagens, o que torna esses animais mais expostos a infecções parasitárias. O presente estudo teve como objetivo avaliar a soroprevalência de Toxoplasma gondii, Neospora caninum e Leishmania spp. em cães de caça de área rural do Mato Grosso do Sul, Brasil. Foram coletadas amostras de soro de 39 cães da raça Foxhound-americano e as variáveis sexo e idade foram registradas. As amostras de soro foram submetidas a reação de imunofluorescência indireta (RIFI) para detecção dos anticorpos. A soroprevalência foi de 35,9%, 15,4% e 2,6% para Toxoplasma gondii, Neospora caninum e Leishmania spp., respectivamente. Não foi observado diferença estatística entre os sexos para todas as doenças (P>0.05). Os resultados demonstram circulação desses protozoários em cães de caça de uma área rural do estado do Mato Grosso do Sul, o que pode contribuir para a epidemiologia dessas doenças.

Association between Neospora caninum seropositivity and reproductive disorders in girolando cows / [Associação entre a soropositividade para Neospora caninum e distúrbios reprodutivos em vacas girolando]

The aim of this study was to investigate the presence of anti-Neospora caninum antibodies in Girolando cows, in order to evaluate the association between seropositivity and reproductive disorders. Blood samples were collected from 40 dairy cows in their reproductive phase from the cranial superficial epigastric vein. The blood samples were tested using the Indirect Fluorescence Antibody Test (IFAT) to detect anti-N.caninum antibodies. The serological results were used to verify whether there was any association with the manifestation of reproductive disorders based on data from the records of reproductive history from 2017 to 2018 as well as the clinical observations of the herd throughout this study. The Fisher exact test was used to verify the existence of an association between the serology and reproductive disorders, adopting a 95% confidence level. The serological results showed a 27.5% seroprevalence in the herd for N. caninum, however, after statistical analysis, no association between seropositivity and reproductive disorders was found in the evaluated herd. Although the studied population is infected with Neospora caninum, we can infer that anti-Neospora caninum antibodies present in Girolando dairy cows at the UFRRJ Dairy Cattle Facility are not associated with the occurrence of reproductive disorders.(AU)

O objetivo deste estudo foi investigar a presença de anticorpos anti-Neospora caninum em vacas Girolando, avaliando-se a associação entre a soropositividade e os distúrbios reprodutivos. Foram coletadas amostras de sangue da veia epigástrica superficial cranial de 40 vacas leiteiras em fase reprodutiva, sendo as amostras testadas pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI) para detecção de anticorpos anti-N. caninum. A partir dos resultados sorológicos, foi realizada a verificação de associação, ou não, com a manifestação de distúrbios reprodutivos, coletados nos registros de histórico reprodutivo entre 2017 e 2018 e observações do rebanho no transcorrer do estudo. O teste exato de Fisher foi utilizado para verificar a existência de associação entre a sorologia e os distúrbios reprodutivos, adotando-se nível de confiança de 95%. O resultado do estudo demonstrou uma soroprevalência no rebanho de 27,5% para N. caninum, contudo, após análise estatística, não foi confirmada a associação entre soropositividade e distúrbios reprodutivos no rebanho avaliado. Apesar de a população estudada estar infectada com o Neospora caninum, pode-se inferir que anticorpos anti-Neospora caninum presentes em vacas leiteiras Girolando do Setor de Bovinocultura de Leite da UFRRJ não estão associados à ocorrência de distúrbios reprodutivos.(AU)

Performance of the Dot-blot test method for detecting antibodies to Sarcocystis spp. in cattle / Desempenho do teste Dot-blot para detecção de anticorpos para Sarcocystis spp. em bovinos

Serological techniques can detect antibodies against Sarcocystis spp., Neospora caninum and Toxoplasma gondii antigens in single or mixed infections. Immunofluorescent antibody tests (IFAT) is considered the gold standard technique for Sarcocystosis diagnostic in cattle serum and a positive IFAT result reflects Sarcocystis spp. infection. Therefore, the aims of the present study were to compare IFAT and Dot-blot for sarcocystosis diagnostic in experimentally infected mice and to investigate serological cross-reactions with N. caninum and T. gondii in these methods. Mice (Mus musculus) were inoculated intraperitoneally with bradizoites of Sarcocystis spp. or tachyzoites of N. caninum or T. gondii. Serum samples were obtained and analyzed by IFAT and Dot-blot for the three protozoa. Serum from N. caninum and T. gondii experimentally infected mice were tested by IFAT and reacted only to N. caninum or T. gondii antigens, respectively. Specific antibodies against Sarcocystis spp. were present in all animals experimentally infected with this protozoan, with IFAT titers from 10 to 800. Serum samples from mice experimentally infected with Sarcocystis spp., N. caninum and T. gondii and tested by Dot-blot demonstrated no cross reaction between protozoa. A Dot-blot using Sarcocystis spp. antigen appears to be a good alternative to IFAT in the serological diagnosis of Sarcocystosis.(AU)

As técnicas sorológicas podem detectar anticorpos contra os antígenos de Sarcocystis spp., Neospora caninum e Toxoplasma gondii em infecções únicas ou mistas. O teste de anticorpos imunofluorescentes (IFAT) é considerado a técnica padrão-ouro para o diagnóstico de sarcocistose no soro de bovinos e um resultado positivo de IFAT reflete Sarcocystis spp. infecção. Portanto, os objetivos do presente estudo foram comparar IFAT e Dot-blot para diagnóstico de sarcocistose em camundongos infectados experimentalmente e investigar reações cruzadas sorológicas com N. caninum e T. gondii nesses métodos. Os camundongos (Mus musculus) foram inoculados intraperitonealmente com bradizoítos de Sarcocystis spp. ou taquizoítos de N. caninum ou T. gondii. As amostras de soro foram obtidas e analisadas por IFAT e Dot-blot para os três protozoários. O soro de N. caninum e T. gondii infectados experimentalmente foram testados por IFAT e reagiram apenas aos antígenos de N. caninum ou T. gondii, respectivamente. Anticorpos específicos contra Sarcocystis spp. estavam presentes em todos os animais experimentalmente infectados com este protozoário, com títulos de IFAT de 10 a 800. Amostras de soro de camundongos infectados experimentalmente com Sarcocystis spp., N. caninum e T. gondii e testadas por Dot-blot não demonstraram reação cruzada entre protozoários. Um Dot-blot usando Sarcocystis spp. O antígeno parece ser uma boa alternativa ao IFAT no diagnóstico sorológico da sarcocistose.(AU)

Survey of Toxoplasma gondii, Neospora caninum and Sarcocystis neurona antibodies in wild red-tailed Amazon parrots (Amazona brasiliensis) / Pesquisa de anticorpos anti-Toxoplasma gondii, anti-Neospora caninum e anti-Sarcocystis neurona em papagaios-de-cara-roxa (Amazona brasiliensis) de vida livre

Abstract Toxoplasma gondii, Neospora caninum and Sarcocystis neurona are obligate intracellular parasites within the phylum Apicomplexa. The red-tailed Amazon parrot (Amazona brasiliensis) is a near-threatened species of psittacine that is endemic to the Atlantic Forest of Brazil and has been designated as a bioindicator because of its sensitivity to environmental qualitative status and changes. The aim of this study was to evaluate the presence of antibodies against T. gondii, N. caninum and S. neurona in wild red-tailed Amazon parrot nestlings on Rasa Island, Brazil. Blood samples were collected from 51 parrots and plasma samples were stored at - 20 °C until immunofluorescence antibody tests (IFAT) were performed. Antigen slides were prepared using tachyzoites of T. gondii (RH strain) and, N. caninum (NC-1 strain) and using merozoites of S. neurona (SNR37 strain). Plasma samples were tested at initial dilutions of 1:16 for T. gondii, 1:50 for N. caninum and 1:5 for S. neurona. An anti-chicken antibody conjugated with FITC was used as a secondary antibody at 1:50 dilution. No antibodies for any of these three protozoa were found, thus suggesting that these wild red-tailed Amazon parrot nestlings had not been exposed to these parasites.

Resumo Toxoplasma gondii, Neospora caninum e Sarcocystis neurona são protozoários intracelulares do filo Apicomplexa. O papagaio-de-cara-roxa (Amazona brasiliensis) é um psitacídeo endêmico da floresta atlântica, considerado uma espécie quase ameaçada de extinção e bioindicadora por sua sensibilidade às mudanças no ambiente. O objetivo do presente estudo foi detectar a presença de anticorpos contra T. gondii, N. caninum e S. neurona em filhotes de papagaios-de-cara-roxa (Amazona brasiliensis) de vida livre na Ilha Rasa, Brasil. Amostras de sangue foram coletadas de 51 papagaios e armazenadas a - 20ºC até a realização da Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). As lâminas de RIFI com os antígenos, foram preparadas com taquizoítos de T. gondii (cepa RH) e N. caninum (cepa NC-1) e com merozoítos de S. neurona (cepa SNR37). Os plasmas foram diluídos em PBS (Ph 7,2) nas diluições 1:16 para T. gondii, 1:50 para N. caninum e 1:5 para S. neurona. O conjugado anti-IgG de galinhas marcado com fluoresceína (FITC) foi utilizado na diluição de 1:50. Não foram detectados anticorpos para os três protozoários nas amostras sugerindo que os filhotes de papagaios-de-cara-roxa não foram expostos aos protozoários.

Serological and molecular investigation of Leishmania spp. infection in cats from an area endemic for canine and human leishmaniasis in Northeast Brazil / Investigação sorológica e molecular da infecção por Leishmania spp. em gatos provenientes de uma área endêmica para leishmaniose canina e humana no nordeste brasileiro

Abstract The aim of this study was to investigate the occurrence of Leishmania spp. antibodies, and its association with feline immunodeficiency virus (FIV) and feline leukemia virus (FeLV), in domestic cats from an area endemic for canine and human leishmaniasis in Rio Grande do Norte State, Brazil. Ninety-one cats were subjected to a complete clinical exam, and blood samples were collected. An epidemiological questionnaire was used to investigate the risk factors. IgG anti-Leishmania spp. antibodies were detected by immunofluorescence antibody test (IFAT), with a cut-off value of 1:40. Polymerase chain reaction (PCR) was performed to detect genetic material of Leishmania spp. in the blood samples. The presence of antibodies against FIV and antigens of FeLV was evaluated using an immunochromatographic test. Seropositivity for Leishmania spp., FIV, and FeLV was observed in 14/91 (15.38%), 26/91 (28.57%), and 3/91 (3.29%) cats, respectively. All samples gave negative results on PCR analysis. Based on these data, no significant statistical association was observed between seropositivity for Leishmania spp., and sex, age, presence of clinical signs, evaluated risk factors, and positivity for retroviruses. These findings demonstrated for the first time that cats from Mossoró, Rio Grande do Norte, are being exposed to this zoonosis and might be part of the epidemiological chain of transmission of visceral leishmaniasis.

Resumo O objetivo do presente estudo foi investigar a ocorrência de anticorpos contra Leishmania spp., e sua associação com o vírus da imunodeficiência felina (FIV) e o vírus da leucemia felina (FeLV), em felinos domésticos provenientes de uma área endêmica no estado do Rio Grande do Norte, para a leishmaniose visceral canina e humana. Noventa e um gatos foram submetidos a exame clínico completo e amostras de sangue foram coletadas. Um questionário epidemiológico foi feito para investigar fatores de risco. Anticorpos IgG anti-Leishmania spp. foram identificados por meio da imunofluorescência indireta (RIFI), adotando-se como ponto de corte a diluição de 1:40. A reação em cadeia da polimerase (PCR) foi executada visando detectar o material genético de Leishmania spp. a partir de amostras de sangue total. Para avaliar a presença de anticorpos contra o FIV e antígenos do FeLV foi utilizado um teste imunocromatográfico. Observou-se soropositividade em 14/91 (15,38%), 26/91 (28,57%) e 3/91 (3,29%) animais para Leishmania spp., FIV e FeLV, respectivamente. Nenhuma amostra foi positiva na PCR. Baseado nestes dados, não foi observada nenhuma associação estatística significativa entre a soropositividade para Leishmania spp. e gênero, idade, presença de sinais clínicos, fatores de risco avaliados e positividade para as retroviroses. Esses achados demonstram pela primeira vez que felinos da cidade Mossoró, Rio Grande do Norte, estão sendo expostos a esta zoonose, sugerindo que os mesmos podem estar participando da cadeia epidemiológica de transmissão da leishmaniose visceral.

Serosurvey of Toxoplasma gondii, Sarcocystis sp. and Neospora caninum in geese (Anser sp.) from urban parks and captivity / Soroprevalência de Toxoplasma gondii, Sarcocystis sp. e Neospora caninum em gansos (Anser sp.) de parques urbanos e cativeiro

Abstract Geese, ducks, mallards, and swans are birds of the order Anseriformes, which are found in the wild, in zoos and parks, and raised for meat consumption. Toxoplasma gondii, Sarcocystis sp., and Neospora caninum are protozoans of several species of animals. Wild and domestic birds can serve as intermediate hosts, disseminators and potential sources of infection of these protozoa to humans through contaminated meat. The aims of this study were: (i) to perform a serological survey of T. gondii, Sarcocystis sp. and N. caninum in geese (Anser sp.) from public parks and from captivity and (ii) to compare seroprevalence between these two locations. Antibodies were detected by Immunofluorescence antibody test using the serum of 149 geese. Antibodies to Sarcocystis sp., T. gondii, and N. caninum were detected in 28.18%, 18% and 0.67% of geese, respectively; 57% of geese from urban parks and 26.53% of geese from captivity were seropositive for at least one protozoa. The results indicate environmental contamination, particularly for the occurrence of antibodies against T. gondii - a zoonosis that causes toxoplasmosis and is transmitted through oocyte ingestion. This is the first serological survey of T. gondii, Sarcocystis sp. and N. caninum in geese from urban parks in Curitiba, Brazil.

Resumo Gansos, patos, marrecos e cisnes são aves da ordem Anseriformes, encontrados em vida livre, zoológicos, parques e criados para consumo da carne. Toxoplasma gondii, Sarcocystis sp. e Neospora caninum são protozoários capazes de infectar diversas espécies animais. Aves domésticas e silvestres podem ser hospedeiras intermediárias e servir como disseminadoras e potenciais fontes de infecção para seres humanos por meio da carne. O objetivo do estudo foi 1) realizar a soroprevalência de T. gondii, Sarcocystis sp. e N. caninum em gansos (Anser sp.) provenientes de parques públicos e de um cativeiro e 2) comparar a soroprevalência entre os locais. Foi realizada sorologia de 149 Anser sp. pelo método da reação de imunofluorescência indireta. Anticorpos para Sarcocystis sp., T. gondii e N. caninum foram encontrados em 28,18%, 18%, e 0,67% dos animais, respectivamente; 57% dos gansos dos parques públicos e 26,53% dos animais cativos foram soropositivos para algum dos protozoários. A ocorrência de anticorpos para tais protozoários indica contaminação ambiental, ressaltando a alta prevalência de anticorpos para T. gondii, zoonose transmitida por ingestão dos oocistos. Sugere-se investigação da água e medidas ambientais para reduzir a contaminação dos animais e do ambiente. Este é o primeiro trabalho que avaliou sorologicamente gansos provenientes de parques urbanos de Curitiba, Paraná para T. gondii, Sarcocystis sp. e N. caninum.

Anti-Neospora caninum antibodies in beef cattle from the northern region of Paraná state, Brazil / Anticorpos anti-Neospora caninum em bovinos de corte da região norte do estado do Paraná, Brasil

ABSTRACT: The presence of anti-Neospora caninum antibodies in beef cattle slaughtered in the northern region of the state of Paraná, Brazil, was evaluated. A total of 401 blood samples were collected; 281 samples from the municipality of Rolândia and 120 from the municipality of Borrazópolis, between April 2015 and November 2016. Of the total samples, 289 were from females and 112 from males, aged one and a half to eight years. Indirect fluorescent antibody test (IFAT) was performed, using a cut-off of 1:100. Variables were tabulated for statistical analyses (Fisher's exact test and chi-square tests, p≤0.05). The analysis showed that of the 401 samples, 37 were positive for N. caninum, indicating a prevalence of 9.2 %, and observed titers were 1:100 (16), 1:200 (14), and 1:400 (7). The variables sex, age, and location did not differ statistically (p>0.05). Our results showed a sero-occurrence of N. caninum in cattle slaughtered in the northern region of the state of Paraná.

RESUMO: A presença de anticorpos anti-Neospora caninum em bovinos de corte, abatidos na região norte do estado do Paraná, Brasil, foi avaliada. Foram coletadas 401 amostras de sangue, sendo 281 amostras no município de Rolândia e 120 no municipio de Borrazopolis, entre os meses de abril de 2015 e novembro de 2016. Do total de amostras, 289 eram de fêmeas e 112 amostras de machos, na faixa etária de um ano e meio até oito anos de idade. Foi realizada a reação da imunofluorescência indireta (RIFI) utilizando ponte de corte de 1:100. Em seguida, foram tabulados as variáveis para análise estatística (testes exato de Fisher e do qui-quadrado, p≤0,05). A análise mostrou que das 401 amostras, 37 foram positivas para N. caninum, indicando uma prevalência de 9,2 % e os títulos observados foram 1:100 (16), 1:200 (14) e 1:400 (7). As variáveis sexo, idade e local não diferiram estatisticamente (p>0,05). Nossos resultados demonstram uma soro-ocorrência de N. caninum em bovinos abatidos na região norte do Paraná.

Serological diagnosis and risk factors for Coxiella burnetii in goats and sheep in a semi-arid region of Northeastern Brazil / Diagnóstico sorológico e fatores de risco para Coxiella burnetii em caprinos e ovinos da região semiárida do nordeste do Brasil

Abstract Coxiella burnetii is a zoonotic agent transmitted mainly by small ruminants. In Brazil the disease has been classified as a notifiable disease since 2013, when human cases were reported. This study aimed to identify risk factors associated with the presence of anti- Coxiella burnetii antibodies in goats and sheep in a semiarid region of Northeastern Brazil. Sera of 412 goats and 403 sheep from municipality of Petrolina, Pernambuco, were examined by the Indirect Fluorescent Antibody Test (IFAT) against antigens of C. burnetii. Information about management variables (independent variables) that could be associated with the presence of the microorganism (dependent variables) were obtained from the supervisor of each farm. It was determined that 2.2% (9/412) of the goats and 2.1% (9/403) of the sheep had antibodies reactive to C. burnetii. The presence of anti-C. burnetii antibodies was associated with the dry area of the Sequeiro (a region in the northern part of the municipality of Petrolina) (P = 0.025), male sheep (P = 0.020), and intensive goat breeding (P = 0.005). This study therefore showed the presence of anti-C. burnetii antibodies in goat and sheep, confirming for the first time that this agent is likely circulating among goat herds in the Caatinga Biome, semi-arid of Brazil.

Resumo Coxiella burnetii é um agente zoonótico transmitido principalmente por pequenos ruminantes. No Brasil, a doença foi classificada como de notificação compulsória desde 2013, quando casos humanos foram relatados. O objetivo deste estudo foi identificar os fatores de risco associados à presença de anticorpos anti-Coxiella burnetii em caprinos e ovinos em uma região semiárida do Nordeste do Brasil. Este estudo envolveu um inquérito sorológico de 412 caprinos e 403 ovinos em fazendas do município de Petrolina, no estado de Pernambuco. Os soros foram examinados pela Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) contra antígenos de C. burnetii . Informações sobre variáveis ​​de manejo (variáveis ​​independentes) que poderiam estar associadas à presença do microrganismo (variáveis ​​dependentes) foram obtidas do proprietário de cada fazenda. Foi determinado que 2,2% (9/412) dos caprinos e 2,1% (9/403) dos ovinos tinham anticorpos reativos a C. burnetii. A presença de anticorpos anti-C. burnetii foram associados com a área seca do Sequeiro (região no norte do município de Petrolina) (P = 0,025), ovinos machos (P = 0,020) e criação intensiva de caprinos (P = 0,005). Este estudo, portanto, observou a presença de anticorpos anti-C. burnetii em pequenos ruminantes, confirmando pela primeira vez que este agente pode estar circulando em rebanhos caprinos no bioma Caatinga, semiárido do Brasil.

Prevalence and associated factors with Neospora caninum infection in female water buffaloes (Bubalus bubalis) from Pernambuco, Brazil / Prevalência e fatores associados à infecção por Neospora caninum em fêmeas bubalinas (Bubalus bubalis ) em Pernambuco, Brasil

Abstract Neosporosis is one of the major parasitic diseases that causes reproductive problems, making it a limitation for optimal efficiency in livestock. The aim of the present study was to conduct a seroepidemiological survey for bubaline neosporosis and to analyse associated factors associated with N. caninum infection in female water buffaloes in the State of Pernambuco, northeast Brazil. The prevalence of N. caninum infection in the bubaline herds examined was 35.4% (122/345; 95% CI: 30.4%-40.7%), at least 1 Neospora-positive animal was found in each farm. Associated factors for N. caninum infection identified in this study were exclusive pasture feeding (OR: 5.91, p <0.001) and purchase of animals of free fair and from reputable sellers (OR: 1.85; p =0.045). In this survey, we document the occurrence of neosporosis in female water buffaloes. Associated factors should be controlled in order to reduce the risk of N. caninum infection in these herds.

Resumo A neosporose é uma das principais doenças parasitárias que causa problemas reprodutivos, torna-se possível limitar para a máxima eficiência na pecuária. Objetivou-se com este estudo realizar um inquérito soroepidemiológico e analisar os fatores associados à infecção por N. caninum em fêmeas bubalinas no estado de Pernambuco, Brasil. Observou-se uma prevalência de 35,4% (122/345; IC 95%: 30,4%-40,7%) para infecção por N. caninum e 100% das propriedades possuíam ao menos um animal positivo. Os fatores associados à infecção por N. caninum neste estudo foram alimentação exclusiva a pasto (OR: 5,91; p<0,001) e aquisição de animais de feiras livres e criadores conhecidos (OR: 1,85; p=0,045). Registra-se a ocorrência da infecção por N. caninum em fêmeas bubalinas e os fatores associados que precisam ser corrigidos para reduzir o risco de infecção nesses rebanhos.

Effect of chaotropes in Chagas disease and leishmaniasis cross-reacting serology assays for epidemiological surveys

Abstract INTRODUCTION: Serological cross-reactivity between leishmaniasis and Chagas disease, especially at low titers, leads to difficulties of the seroepidemiological interpretation. METHODS: We have studied the ability of urea as a chaotrope to select high-avidity antibodies in IgG ELISA, thus reducing low-avidity IgG cross-reactivity in serologically positive samples in both assays. RESULTS: Using 0.5M urea for diluting the sample efficiently defined leishmaniasis or double infections in high-avidity IgG ELISA and eliminated false-positive results. CONCLUSIONS: The use of a chaotropic diluting agent is useful for improving the specificity of Chagas disease and leishmaniasis immunoassays.

Molecular and serological detection of Leishmania spp. in horses from an endemic area for canine visceral leishmaniasis in southeastern Brazil / Detecção molecular e sorológica de infecção por Leishmania (Leishmania) infantum em cavalos na região Sudeste do Brasil

This study aimed to verify the occurrence of Leishmania spp. and Leishmania (Leishmania) infantum in horses from a visceral leishmaniasis endemic area in Brazil. DNA samples from blood and conjunctival swab (CS) were tested by PCR and Indirect Immunofluorescence Antibody Test (IFAT). Although none of the horses was clinically sick, animals infected by Leishmania spp. were found and some could be characterized as infected by L. (L.) infantum. From 40 horses, 100% of the animals were positive by blood PCR, 90% (36/40) by CS PCR, and 2.5% (01/40) in serodiagnosis, by IFAT. Six from these 40 horses were L. (L.) infantum positive by blood PCR. Direct sequencing and analysis of amplicons resulted in a sequence to evolutionary analysis. Results indicate the presence of Leishmania spp. and L. (L.) infantum infecting healthy horses in Brazil. The presence of Leishmania spp. and L. (L.) infantum DNA in asymptomatic horses suggests that they can be important reservoirs of these parasites, a highly relevant finding for the epidemiological surveillance of the diseases they cause.(AU)

O estudo objetivou verificar a ocorrência de Leishmania spp. e Leishmania (Leishmania) infantum em cavalos de uma região endêmica para leishmaniose visceral do Brasil. Amostras de DNA de sangue e suabe conjuntival (SC) foram testadas pela PCR e pela Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). Embora nenhum cavalo estivesse clinicamente doente, animais infectados por Leishmania spp. e L. (L.) infantum foram encontrados em Ilha Solteira/SP. Dos 40 cavalos, 100% (40/40) foram positivos pela PCR de sangue, 90% (36/40) pela PCR de SC, e 2,5% (01/40) no sorodiagnóstico, pela RIFI. Seis desses 40 cavalos foram positivos para L. (L.) infantum pela PCR de sangue. O sequenciamento direto e a análise dos amplicons resultaram em uma sequência para análise evolutiva. Os resultados indicam a presença de Leishmania spp. e L. (L.) infantum infectando cavalos saudáveis no Brasil. A presença de DNA de Leishmania spp. and L. (L.) infantum em cavalos saudáveis sugere que eles podem ser importantes reservatórios desses parasitas, um achado altamente relevante para a vigilância epidemiológica das doenças que causam.(AU)

Neospora caninum in properties in the west region of Paraná, Brazil: prevalence and risk factors / Neospora caninum em propriedades rurais da região Oeste do Paraná, Brasil: prevalência e fatores de risco

Abstract Neospora caninum is a heteroxenous protozoa, whose definitive hosts are canids and intermediate hosts are herbivores, and is of great importance in cattle. The objectives of this study were to determine the prevalence of N. caninum in dairy cattle and dogs, to detect the presence of the protozoa at the molecular level in aborted fetuses, and to identify the risk factors associated with infection in properties in the western region of the state of Paraná. For this study, 600 bovine serum samples from 60 properties, 163 canine serum samples from 52 properties and 17 bovine fetuses from nine properties were collected. Data were collected using an epidemiological questionnaire to verify the risk factors. Serum samples were analyzed using the indirect fluorescent antibody test. Fetal tissues were analyzed using polymerase chain reaction and subsequent DNA sequencing. Of the bovine samples, 23.67% were positive for N. caninum. Among the canine samples, 11.66% were positive for N. caninum. Risk factors in cattle were history of abortion, low milk production, extensive breeding, and Jersey breed (p<0.05). Protozoan DNA was detected in 52.94% of the 17 fetuses and the sequencing presented high similarity with N. caninum.

Resumo Neospora caninum é um protozoário heteroxeno, cujos hospedeiros definitivos são os canídeos e os hospedeiros intermediários são os herbívoros, apresentando maior importância em bovinos. O objetivo desse trabalho foi determinar a prevalência de N. caninum em bovinos leiteiros e em cães, detectar molecularmente o protozoário em fetos abortados e identificar os fatores de risco associados à infecção em propriedades da região Oeste do estado do Paraná. Para isso, foram coletadas 600 amostras de soro de bovinos provenientes de 60 propriedades, 163 amostras de soro de cães de 52 propriedades e 17 fetos de nove propriedades. Por fim, foram coletados dados em um questionário epidemiológico para verificar os fatores de risco. As amostras de soro foram analisadas por meio da Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) e os tecidos fetais foram analisados utilizando a PCR e posterior sequenciamento de DNA. Das amostras de bovinos, 23,67% foram positivas para N. caninum. Entre os cães, 11,66% foram positivos. Os fatores de risco nos bovinos foram histórico de aborto, baixa produção de leite, criação extensiva e raça Jersey (p<0,05). Dos 17 fetos analisados, em 52,94% foi possível detectar DNA do protozoário, e o sequenciamento mostrou alta similaridade com N. caninum.

Important frequency of Anaplasma phagocytophilum infection in a population of domiciled dogs in an urbanized area in south-eastern Brazil / Importante frequência da infecção por Anaplasma phagocytophilum em uma população de cães domiciliados em área urbanizada no sudeste do Brasil

Anaplasma phagocytophilum is responsible for granulocytic anaplasmosis in humans and various animal species. The aim of the present study was to determine the prevalence of A. phagocytophilum-infected dogs in a residential area of Belo Horizonte, Minas Gerais state, Brazil. A total of 62 dogs were submitted to serological (indirect fluorescent-antibody -IFI) and molecular (PCR) tests. Anti-A. phagocytophilum antibodies were detected in 43.8% of the dogs. Seven dogs (10.9%) were PCR-positive for the msp4 gene, six and four of these were positive for the for the msp2/p44 gene of A. phagocytophilum and 16S rRNA region of granulocytic Anaplasmataceae respectively. This study confirms a relatively high frequency of A. phagocytophilum infection in a population of domiciled dogs in an urbanized area in south-eastern Brazil and highlights the need for further studies on the role of Rhipicephalus sanguineus sensu lato ticks in the transmission of this bacterium to dogs in urban Brazilian areas.(AU)

Anaplasma phagocytophilum é responsável pela anaplasmose granulocítica, doença que acomete seres-humanos e várias espécies de animais. O objetivo do presente estudo foi determinar a prevalência de cães acometidos por A. phagocytophlium em uma área residencial de Belo Horizonte, MG, Brasil. Sessenta e dois cães foram submetidos a testes sorológicos (reação de imunofluorescência indireta - IFAT) e moleculares (PCR). Anticorpos anti-A. phagocytophilum foram detectados em 43,8% dos cães. Sete cães (10,9%) foram positivos no PCR para o gene msp4 de A. phagocytophilum, seis para o gene msp2/p44 A. phagocytophilum e quatro para a região 16S rRNA de Anaplasmataceae granulocíticas. Esse estudo confirma a frequência relativamente alta da infecção por A. phagocytophilum em uma população de cães domiciliados em área urbanizada no sudeste do Brasil e destaca a necessidade de pesquisas para determinar o papel do carrapato Rhipicephalus sanguineus sensu lato na transmissão desse microrganismo para cães de áreas urbanas brasileiras.(AU)

Occurrence of Toxoplasma gondii and risk factors for infection in pigs raised and slaughtered in the Triângulo Mineiro region, Minas Gerais, Brazil / Ocorrência e fatores de risco da infecção por Toxoplasma gondii em suínos criados e abatidos na região do Triângulo Mineiro, Minas Gerais, Brasil

The Triângulo Mineiro region from Minas Gerais state, is an important meat-exporting region of Brazil and data about Toxoplasma gondii infection in pigs raised and slaughtered in this area are scarce. Therefore, the aim of this study was to evaluate the occurrence of T. gondii in swine and establish the risk factors associated with the infection. Samples were collected from 600 pigs raised under intensive system in farms located at three different counties (Carmo do Paranaíba, Patrocínio and Perdizes). The samples were submitted to indirect hemagglutination antibody test with dilution of 1:32 and to indirect immunofluorescence antibody test with a cutoff of 1:64. The occurrence of positive pig was 3.3% (n=20) and 51.8% (n=311) respectively. A significant difference was observed between toxoplasmatic infection and factors such as lineage, animal origin, size of the farm, collective raising with others species, presence of rodents and type of water offered (p≤0.05). There was no difference between gender and the farm goals. The results demonstrated an occurrence of anti-T.gondii antibodies higher than expected for intensive pig raising system on the studied area, which could indicate a possible sanitary management problem on the studied proprieties. Improvements on the raising techniques are necessary to reduce T. gondii infection sources.(AU)

A região do Triângulo Mineiro, no estado de Minas Gerais, é uma importante região exportadora de carne do Brasil e pesquisas sobre a infecção por Toxoplasma gondii em suínos criados e abatidos nesta região são escassos. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrência de T. gondii nesses animais e estabelecer os fatores de risco associados com a infecção. Foram coletadas amostras de 600 suínos criados sob sistema intensivo, em fazendas localizadas em três municípios diferentes (Carmo do Paranaíba, Patrocínio e Perdizes). As amostras foram submetidas à Hemaglutinação Indireta com diluição de 1:32 e à Reação de Imunofluorescência Indireta com ponto de corte 1:64. A ocorrência de suínos positivos foi de 3,3% (n=20) e 51,8% (n=311), respectivamente. Foi observada diferença significativa entre a infecção toxoplásmica e fatores como linhagem, procedência dos animais, tamanho das propriedades, criação em conjunto com outras espécies, presença de roedores e tipo de água consumida (p≤0,05). Não houve diferenças estatísticas entre o sexo e finalidade de produção em relação à infecção por T. gondii. Os resultados demonstraram uma ocorrência de anticorpos anti-T. gondii superior à esperada em criações intensivas de suínos na região estudada, o que poderia indicar uma possível falha no manejo sanitário das propriedades estudadas. Melhorias nas técnicas de criação são necessárias para redução das fontes de infecção por T. gondii nos rebanhos.(AU)

Ehrlichia canis and Rickettsia spp. in dogs from urban areas in Paraiba state, northeastern Brazil / Ehrlichia canis e Rickettsia spp. em cães de áreas urbanas da Paraíba, nordeste do Brasil

Abstract The aims of our study was to identify Ehrlichia canis and antibodies against Rickettsia spp. belonging to the spotted fever group (SFG) in dogs sampled from Paraiba state, northeastern Brazil. Blood and serum samples collected by convenience from dogs in urban areas of five municipalities were analyzed by real-time PCR for the detection of E. canis DNA and by immunofluorescence assay test (IFAT) for the identification of antibodies against Rickettsia rickettsii, R. felis, R. parkeri, R. amblyommii and R. rhipicephali antigens. E. canis DNA was detected in 8.9% (64/719) of the blood samples, whereas 5.63% (43/763) of the serum samples were positive for at least one of the Rickettsia antigens tested by IFAT. This study showed for the first time the occurrence of E. canis and suggested the circulation of SFG Rickettsia in dogs in the study region of Paraiba state, northeastern Brazil.

Resumo Os objetivos do nosso estudo foram identificar Ehrlichia canis e anticorpos contra Rickettsia spp. pertencentes ao Grupo da Febre Maculosa (GFM) em cães amostrados no estado da Paraíba, nordeste do Brasil. As amostras de sangue e soro, coletados por conveniência, de cães em áreas urbanas de cinco municípios foram analisadas por PCR em tempo real para a detecção de DNA de E. canis e pela Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) para identificação de anticorpos contra Rickettsia rickettsii, R. felis, R. parkeri, R. amblyommii e R. rhipicephali. O DNA de E. canis foi detectado em 8,9% (64/719) das amostras de sangue, enquanto que 5,63% (43/763) das amostras de soro foram positivas para pelo menos um dos antígenos de Rickettsia testados por RIFI. Este estudo mostrou pela primeira vez a ocorrência de E. canis e sugere a circulação de Rickettsia do GFM em cães na região em estudo do estado da Paraíba, Nordeste do Brasil.

Occurrences of antibodies against Toxoplasma gondii, Neospora spp. and Sarcocystis neurona in horses and dogs in the municipality of Pauliceia, São Paulo, Brazil / Ocorrências de anticorpos anti-Toxoplasma gondii, Neospora spp. e Sarcocystis neurona em equinos e cães do município de Pauliceia, São Paulo, Brasil

Serum samples from 116 horses and 47 dogs from the municipality of Paulicéia, in the state of São Paulo, Brazil, were examined for anti-Toxoplasma gondii, -Neospora spp. and -Sarcocystis neurona antibodies by means of the indirect fluorescent antibody test (IFAT). The results showed that only one horse was seropositive for T. gondii (0.9%) and anti-Neospora spp. antibodies were detected in three out of the 116 horses tested (2.6%). However, 27 horses showed antibodies against S. neurona (23.8%). Amongst the serum samples from the dogs, 10 out of the 47 dogs showed antibodies against T. gondii (21.3%) and three dogs showed antibodies against Neospora caninum (6.4%). This study reports that in the municipality of Paulicéia dogs in both the rural and the urban area were exposed to T. gondii and N. caninum, while horses in the rural area were exposed to all three protozoa studied, with high occurrence of anti-S. neurona antibodies.(AU)

Amostras de soro de 116 equinos e 47 cães provenientes do município de Paulicéia, São Paulo, foram testadas para detecção de anticorpos anti-Toxoplasma gondii, -Neospora spp. e -Sarcocystis neurona por meio da reação de imunofluorescência indireta (RIFI). Apenas um equino, entre 116 equinos testados, teve diagnóstico soropositivo para T. gondii (0,9%), e três deles (2,6%) apresentaram anticorpos anti-Neospora spp. Entretanto, 27 equinos apresentaram anticorpos anti-S. neurona (23,8%). Nas amostras de cães, dez dos 47 animais apresentaram anticorpos anti-T. gondii (21,3%) e três tiveram diagnóstico soropositivo para Neospora caninum (6,4%). Este estudo relata que no município de Paulicéia os cães das áreas urbana e rural foram expostos a T. gondii e N. caninum, enquanto os equinos da área rural foram expostos aos três protozoários estudados, com alta ocorrência de anticorpos anti- S. neurona.(AU)

Ehrlichia canis and Rickettsia spp. in dogs from urban areas in Paraiba state, northeastern Brazil

Abstract The aims of our study was to identify Ehrlichia canis and antibodies against Rickettsia spp. belonging to the spotted fever group (SFG) in dogs sampled from Paraiba state, northeastern Brazil. Blood and serum samples collected by convenience from dogs in urban areas of five municipalities were analyzed by real-time PCR for the detection of E. canis DNA and by immunofluorescence assay test (IFAT) for the identification of antibodies against Rickettsia rickettsii, R. felis, R. parkeri, R. amblyommii and R. rhipicephali antigens. E. canis DNA was detected in 8.9% (64/719) of the blood samples, whereas 5.63% (43/763) of the serum samples were positive for at least one of the Rickettsia antigens tested by IFAT. This study showed for the first time the occurrence of E. canis and suggested the circulation of SFG Rickettsia in dogs in the study region of Paraiba state, northeastern Brazil.

Resumo Os objetivos do nosso estudo foram identificar Ehrlichia canis e anticorpos contra Rickettsia spp. pertencentes ao Grupo da Febre Maculosa (GFM) em cães amostrados no estado da Paraíba, nordeste do Brasil. As amostras de sangue e soro, coletados por conveniência, de cães em áreas urbanas de cinco municípios foram analisadas por PCR em tempo real para a detecção de DNA de E. canis e pela Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) para identificação de anticorpos contra Rickettsia rickettsii, R. felis, R. parkeri, R. amblyommii e R. rhipicephali. O DNA de E. canis foi detectado em 8,9% (64/719) das amostras de sangue, enquanto que 5,63% (43/763) das amostras de soro foram positivas para pelo menos um dos antígenos de Rickettsia testados por RIFI. Este estudo mostrou pela primeira vez a ocorrência de E. canis e sugere a circulação de Rickettsia do GFM em cães na região em estudo do estado da Paraíba, Nordeste do Brasil.

Serosurvey for Leishmania spp, Toxoplasma gondii, Trypanosoma cruzi and Neospora caninum in neighborhood dogs in Curitiba-Paraná, Brazil / Inquérito sorológico para Leishmania spp, Toxoplasma gondii, Trypanosoma cruzi e Neospora caninum em cães comunitários em Curitiba-Paraná, Brasil

Abstract Neighborhood dogs may act as reservoirs for several zoonotic protozoan infections, particularly in urban areas, thus constituting a potential public health threat. Accordingly, the aim of the present study was to evaluate the exposure of neighborhood dogs to four protozoan pathogens in public areas with high levels of human movement in Curitiba, southern Brazil. Blood samples from 26 neighborhood dogs were screened by means of the indirect immunofluorescent antibody test (IFAT) for Leishmania spp., Toxoplasma gondii, Trypanosoma cruzi and Neospora caninum, and a questionnaire was answered by the respective keeper. A total of 8/26 dogs (30.7%) seroreactive to T. gondii, 3/26 (11.5%) to N. caninum and 2/26 (7.7%) to both were identified. All the samples were seronegative for T. cruzi and Leishmania spp. Pathogen seroreactivity was not associated with the daily human movements or other epidemiological variables investigated (p > 0.05). In conclusion, the low seroprevalence for T. gondii and N. caninum indicated low environmental and food risk for animal infection and the seronegativity for Leishmania spp. and T. cruzi may reflect the absence of these pathogens in urban areas of Curitiba. Moreover, neighborhood dogs may be used as environmental sentinels for the presence of protozoan pathogens and their vectors.

Resumo Cães comunitários podem atuar como reservatórios para algumas zoonoses causadas por protozoários, principalmente em áreas urbanas, constituindo potencial ameaça à saúde pública. Portanto, o objetivo do presente estudo foi avaliar a exposição de cães comunitários a quatro protozoários em áreas públicas com alta circulação de pessoas, em Curitiba, Sul do Brasil. Amostras de sangue de 26 cães comunitários foram testadas pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI) para Leishmania spp., Toxoplasma gondii, Trypanosoma cruzi e Neospora caninum, e um questionário foi respondido pelo respectivo mantenedor. Um total de 8/26 (30,7%) foram sororreagentes para T. gondii, 3/26 (11,5%) para N. caninum e 2/26 (7,7%) para ambos. Todas as amostras foram soronegativas para T. cruzi e Leishmania spp. Não houve associação entre sororreatividade para os patógenos pesquisados e o tráfego diário de pessoas e outras variáveis epidemiológicas analisadas (p > 0.05). Conclui-se a baixa soroprevalência para T. gondii e T. cruzi indica baixo risco ambiental e alimentar para a infecção dos animais, e a soronegatividade para Leishmania spp. e T. cruzi pode refletir a ausência desses patógenos em áreas urbanas de Curitiba. Além disso, os cães comunitários podem atuar como sentinelas ambientais quanto à presença de protozoários e seus vetores.

Serosurvey of Borrelia in dogs, horses, and humans exposed to ticks in a rural settlement of southern Brazil / Soroprevalência e fatores associados a Borrelia em cães, equinos e humanos expostos a carrapatos em um assentamento rural do sul do Brasil

Abstract The aims of the present study were to serosurvey dogs, horses, and humans highly exposed to tick bites for anti-Borrelia burgdorferi s.l. antibodies, identify tick species present, and determine risk factors associated with seropositivity in a rural settlement of Paraná State, southern Brazil. Eighty-seven residents were sampled, along with their 83 dogs and 18 horses, and individual questionnaires were administered. Immunofluorescence antibody test (IFAT) was performed on serum samples and positive samples were subjected to western blot (WB) analysis. Anti-B. burgdorferi antibodies were found in 4/87 (4.6%) humans, 26/83 (31.3%) dogs, and 7/18 (38.9%) horses by IFAT, with 4/4 humans also positive by WB. Ticks identified were mostly from dogs and included 45/67 Rhipicephalus sanguineus, 21/67 Amblyomma ovale, and 1/67 A. cajennense sensu lato. All (34/34) horse ticks were identified as A. cajennense s.l.. No significant association was found when age, gender, or presence of ticks was correlated to seropositivity to Borrelia sp. In conclusion, although anti-Borrelia antibodies have been found in dogs, horses and their owners from the rural settlement, the lack of isolation, molecular characterization, absence of competent vectors and the low specificity of the commercial WB kit used herein may have impaired risk factor analysis.

Resumo Os objetivos do presente estudo foram realizar um levantamento sorológico de cães, cavalos e humanos altamente expostos a picadas de carrapatos para anticorpos anti-B. burgdorferi s.l., identificar as espécies de carrapatos presentes, e determinar os fatores de risco associados a soropositividade em um assentamento rural do Estado do Paraná, sul do Brasil. Oitenta e sete residentes foram amostrados junto com seus respectivos 83 cães e 118 cavalos e questionários individuais foram aplicados. O teste de imunofluorescência indireta (IFI) foi realizado nas amostras sorológicas e as positivas foram submetidas a análise por western blot (WB). Anticorpos anti-B. burgdorferi foram detectados em 4/87 (4,6%) humanos, 26/83 (31,3%) cães e 7/18 (38,9%) cavalos pela IFI, com 4/4 humanos também positivos pelo WB. Os carrapatos identificados foram em sua maioria de cães e incluíram 45/67 Rhipicephalus sanguineus, 21/67 Amblyomma ovale e 1/67 A. cajennense sensu lato. Todos (34/34) carrapatos dos cavalos foram identificados como A. cajennense s.l.. Não foram observadas diferenças estatísticas entre idade, sexo ou presença de carrapatos e soropositividade para Borrelia sp. Em conclusão, embora anticorpos anti-Borrelia tenham sido encontrados em cães, equinos e seus proprietários do assentamento rural, a ausência de isolamento, caracterização molecular, ausência de vetores competentes e baixa especificidade do kit comercial de WB utilizado podem ter limitado a análise de fatores de risco.